轉(zhuǎn)基因 Cry1C 試劑盒

【原理】
轉(zhuǎn)基因 Cry1C 試劑盒系用特異性抗 Cry1C 單抗包被的微孔板和酶標(biāo)記抗 Cry1C 單抗，雙抗體夾心法檢測(cè) Cry1C 基因表達(dá)產(chǎn)物，可以高靈敏度和特異性的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物中的 Bt-Cry1C 蛋白。

【試劑盒組份（規(guī)格）】
預(yù)包被板（抗 Cry1C 單抗）             12 孔×8
Cry1C 酶標(biāo)抗體                      12 ml×1 瓶
20×濃縮洗滌液                      30 ml×1 瓶
5×抽提液/稀釋緩沖液                30 ml×1 瓶
底物液 A                            7 ml×1 瓶
底物液 B                            7 ml×1 瓶
終止液                              7 ml×1 瓶
使用說(shuō)明書(shū)                          1 份
0ppb 陰性對(duì)照                       1ml
3 個(gè)不同濃度的標(biāo)樣：
0.6 ppb，2.5 ppb，6.0 ppb           各 1ml

【試劑準(zhǔn)備】
試劑盒中的 20×濃縮洗滌液 30 ml 加 570 ml 滅菌 ddH2O 溶解稀釋至 1×洗滌液，
5×抽提液（30 ml）加 120 ml ddH2O 稀釋至 1×抽提液，4℃存放備用。

【樣品準(zhǔn)備】
稱(chēng)取約 20 mg 葉片，加 0.5 ml 1×抽提液（使用前 30 min 放置室溫）研磨至勻漿，室溫放置 30 min，測(cè)定前把樣品上清液稀釋 5-20 倍。
測(cè)定莖干和胚乳中的 Bt 蛋白時(shí)，樣品稱(chēng)取約 40 mg，加 1 ml 1×抽提液研磨。

【ELISA 反應(yīng)】
1. 依次加 100 μl 陰性對(duì)照，標(biāo)準(zhǔn)品（3 個(gè)不同濃度的標(biāo)樣： 0.6 ppb，2.5 ppb，6.0 ppb）和待測(cè)樣品至 96 孔板；
2. 用封口膜蓋住 96 孔板，快速搖動(dòng)平板混勻樣品；
3. 37℃恒溫箱孵育 30 min；
4. 倒掉 96 孔板中液體，每孔加入 1×洗滌液 250 μl 洗滌微孔板，洗板 5 次，用吸水紙拍干；
5. 按順序在每個(gè)小孔中加入 100 μl Cry1C-酶標(biāo)抗體，然后重復(fù)步驟 2；
6. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min；
7. 倒掉 96 孔板中液體，每孔加入 1×洗滌液 250 μl 洗滌微孔板，洗板 5 次，用吸水紙拍干；
8. 依次加入 50 μl 底物 A 液，50 μl 底物 B 液，重復(fù)步驟 2；
9. 37 ℃恒溫箱孵育 10 min，加 50 μl 終止液，充分混勻終止反應(yīng)，15 min 以?xún)?nèi)在酶標(biāo)儀上讀取結(jié)果。 在 450 nm 為主波長(zhǎng)，630 nm 為次波長(zhǎng)（或單波長(zhǎng) 450nm）下，用空白孔校零，再讀取各孔 OD 值。

【注意事項(xiàng)】
1. 測(cè)定中需使用的所有試劑和 96 孔板提前 30 min 放置室溫溫育（否則會(huì)影響試驗(yàn)準(zhǔn)確性），注意 12 連管必須溫育后再?gòu)钠桨迳先∠拢词褂猛甑念A(yù)包被板條應(yīng)置于有干燥劑的封口袋中密封保存；
2. 試劑使用前應(yīng)充分搖勻；
3. 搖動(dòng)平板混勻時(shí)注意避免樣品之間交叉污染；
4. 使用洗滌液漂洗時(shí)，洗滌液需要填滿每個(gè)小孔，進(jìn)行充分漂洗；
5. 研磨好的樣品如果不能一次全部測(cè)量，可以暫時(shí)在 4 ℃避光保存，但是最好在 24 h 內(nèi)測(cè)定；
6. 結(jié)果判讀請(qǐng)?jiān)诜磻?yīng)終止后 15 min 內(nèi)完成。

【Bt 蛋白濃度計(jì)算公式】

Bt 蛋白濃度（μg/g）=