葉綠素含量測定方法

葉綠素是光合作用所必須的物質(zhì)，沒有葉綠素，就不可能正常地進(jìn)行光合作用，使光能轉(zhuǎn)化為化學(xué)能。葉綠素可見于綠色植物，藍(lán)綠藻等生物體，分為葉綠素a，葉綠素b，葉綠素c，葉綠素d四種。葉綠素存在于葉綠體的類囊體內(nèi)。

葉綠素含量測定的三種方法

葉綠素含量跟光合作用速率、植物營養(yǎng)狀況等指標(biāo)密切相關(guān)，通常，我們會(huì)通過對(duì)葉綠素含量的測定，來了解植物的生長狀況。一般，植物葉綠素含量測定有三種：分光光度法，活體葉綠素儀法和光聲光譜法。其中分光光度法是應(yīng)用最廣泛的葉綠素含量測定方法。

圖　珊瑚樹葉片葉綠素在不同提取液中的吸收光譜

1——95% 丙酮2乙醇       2——95% 乙醇

           3——80% 丙酮             4——95% 丙酮2乙醇(勻漿)

葉綠素含量的計(jì)算

葉綠素含量測定首先得提取葉綠體色素，葉綠體色素中含有葉綠體a，葉綠體b，胡蘿卜素和葉黃素。在提取葉綠體色素時(shí)，我們使用不同的試劑，如丙酮，乙醇等有機(jī)物。當(dāng)試劑不同時(shí)，所得到的結(jié)果也會(huì)不同。上圖中我們使用四種不同的溶劑，進(jìn)行葉綠體色素的提取。圖中通過對(duì)四種溶劑在600nm-700nm波長間的吸光量進(jìn)行比較，從而計(jì)算葉綠素含量，而從圖中，我們可以大致得到，這四種葉綠素提取液的光吸收性質(zhì)基本相同。

利用分光光度法測定葉綠素含量是依據(jù)Lambert-Beer定律，數(shù)學(xué)表達(dá)式為A=Kbc。其中，A為吸光度；K為吸光系數(shù)；b為溶液的厚度；c為溶液濃度。

葉綠素a,b的丙酮溶液在可見光范圍內(nèi)的最大吸收峰分別在663nm和645nm處。葉綠素a和b在663nm處的吸光系數(shù)分別為82.04和9.27；在645nm處的吸光系數(shù)分別為16.67和45.60。根據(jù)Lambert-Beer定律，我們可以列出方程：

D663 = 82.04Ca+9.27Cb

D645 = 16.67Ca+45.60Cb

根據(jù)以上方程組，可以求得：

Ca = 12.72D663 – 2.59D645

Cb = 22.88D645 – 4.67D663

然后我們又可求得葉綠素總量CT =（D652 × 1000）/ 34.5

上圖是不同的葉綠素提取液在提取葉綠素時(shí)的進(jìn)度，可以看出，差別還是挺大的。大家可自己比較下。從圖中我們可以發(fā)現(xiàn)，95% 丙酮2乙醇(勻漿)的提取效果最佳，因此，我們在進(jìn)行葉綠素含量測定的時(shí)候，可以考慮運(yùn)用95% 丙酮2乙醇(勻漿)作為提取液。

那么，目前我們已經(jīng)發(fā)明了比較方便的用于測量葉綠素含量的儀器—葉綠素含量測定儀，它是通過測量植物的葉綠素相對(duì)含量來了解土壤的性能指標(biāo)和植物的硝基需求量，并了解植物的生長狀況。

圖 葉綠素含量測定儀

葉綠素含量測定儀的技術(shù)參數(shù)